畜禽血清中AFB1生物标志物的测定—高效液相色谱法(征求意见稿)

发布日期:2020-08-31 14:49:09   来源 : unknown    作者 :unknown    浏览量 :191
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安徽省质量技术监督局《关于下达2018年第一批安徽省地方标准制修订计划的函》(皖质函〔2018〕326号)的要求,由安徽农业大学等单位编制的省地方标准《畜禽血清中AFB1生物标记物的测定—高效液相色谱法(征求意见稿)》已完成了起草,现征求各有关单位、专家意见,请提出修改意见,并于2020年9月17日前填写《安徽省地方标准征求意见表》电子版反馈至安徽农业大学,逾期不反馈,视为无意见。E-mail: wangxichun@ahau.edu.cn

更多详情,请登录安徽省市场监督管理局官方网站查询。

节选该标准部分内容:

本标准规定了畜禽血清中黄曲霉毒素B1(AFB1)生物标志物高效液相色谱法测定的原理、试剂和设备、分析步骤、分析结果的表述、重复性、检出限与定量限、回收率。本标准适用于畜禽血清中AFB1生物标志物的测定。

规范性引用文件:《GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法》。

原理

通过蛋白酶的消化作用,从血清白蛋白中释放出AFB1生物标志物(AFB1-Lysine),并采用固相萃取柱进一步浓缩。浓缩的AFB1生物标志物经高效液相色谱仪进行分离,在激发波长为405 nm和发射波长470 nm的荧光检测器中检测。

试剂

甲醇(CH3OH):色谱纯。

磷酸二氢铵(NH4H2PO4)。

叠氮化钠(NaN3)。

白蛋白试剂(DMA)。

蛋白检测染料试剂浓缩液(考马斯亮蓝G-250)。

氯化钠(NaCl)。

磷酸氢二钠(Na2HPO4)。

磷酸二氢钾(KH2PO4)。

氢氧化铵((NH4OH)。

甲酸(HCOOH)。

设备

高效液相色谱仪,带荧光检测器。

固相萃取柱。

粒径5 µm C18高效液相色谱柱(250 × 4.6 mm)。

涡旋振荡器。

微量进样器。

天平:感量0.0001 g。

pH计。

超低温冰箱。

离心机:转速≥4000 r/min。

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血清总蛋白浓度测定

4 ℃下取1 mg/mL蛋白标准品置于玻璃管中用于制备标准曲线,各管添加量见表 1;取待测血清5 μL至离心管中,加入95 μL水稀释样品,涡旋混合均匀,然后将4 μL稀释样品转移到预先添加796 μL色谱级用水的玻璃管中;向所有管中加入200 μL考马斯亮蓝G-250,室温下涡旋,混合均匀转移至待测试管中;以试管1作为空白,在595 nm的紫外波长下,使用分光光度计进行测量;记录标准品和样品的吸光度读数,根据标准吸光度制作标准曲线,由公式计算可得总蛋白浓度。

检出限与定量限

本方法中血清AFB1生物标志物的最低检出限为0.02 ng/mL,定量限为1.0 ng/mL。

回收率

添加浓度在0.5 ng/mL~1.0 ng/mL时,回收率在75~94 %之间。




饶梅
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